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細胞學(xué)堂 | 懸浮細胞培養異常解決方法

更新時(shí)間:2023-03-17  |  點(diǎn)擊率:818


懸浮細胞大多胞體呈圓形,不貼于支持物上,呈懸浮生長(cháng),容易大量繁殖。懸浮細胞培養雖比貼壁細胞少了消化的步驟,但培養起來(lái)同樣不易。有碎片、形態(tài)改變、生長(cháng)速度慢、細胞貼壁……每一種異常都牽動(dòng)著(zhù)我們的心。

因此本期細胞學(xué)堂整理了懸浮細胞收貨和培養過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題,并針對各個(gè)問(wèn)題列出解決辦法,帶你逐個(gè)擊破!


運輸常見(jiàn)問(wèn)題及處理方法


1

碎片多

處理方法:懸浮細胞受到運輸或者其他因素導致細胞損傷時(shí),容易產(chǎn)生細胞碎片,碎片可通過(guò)低速離心(800~1000rpm,3min)去除;低速離心同時(shí)也會(huì )丟失細胞,故細胞密度低的時(shí)候不適用,細胞密度低時(shí)應正常轉速離心,保留細胞優(yōu)先。



2

細胞不圓/形態(tài)變了/聚團

處理方法:懸浮細胞受到運輸或者微環(huán)境變化影響時(shí),可能出現變形,聚團等現象,在使用正確培養基和操作都正確的情況下,一般繼續培養一周左右可以恢復原狀。


培養過(guò)程常見(jiàn)問(wèn)題及處理方法


1

細胞不圓/形態(tài)變了/聚團

處理方法如下:

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少量細胞聚團、呈葡萄串狀,屬于正?,F象,特別是細胞密度較低時(shí),易出現這種情況。通過(guò)靜養(少操作,少觀(guān)察) 、補加血清(5%)等方式,讓細胞密度增高逐漸適應環(huán)境后可以恢復正常;

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血清品牌會(huì )影響細胞生長(cháng)狀態(tài),如果一種不會(huì )聚團的細胞,養出來(lái)全部聚團,分散的細胞很少,這時(shí)候要考慮血清的影響。


2

細胞生長(cháng)慢或不生長(cháng)

處理方法:懸浮細胞有密度依賴(lài)性,在高密度下?tīng)顟B(tài)比較好,低密度時(shí)狀態(tài)較差,所以傳代比例要控制,細胞狀態(tài)不好時(shí),傳代可以不用離心法,而是補液或者半換液的方式,以避免離心損失細胞。


3

細胞發(fā)生貼壁

處理方法如下:

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細胞培養瓶靜置時(shí)間太長(cháng),細胞沉底后會(huì )出現少量貼壁現象,但這種貼壁非常松,吹一下或拍一下細胞就可以起來(lái);此現象為正?,F象,無(wú)需特殊處理。

?

如果細胞貼的非常緊,形態(tài)已經(jīng)變成類(lèi)似于上皮樣時(shí),需考慮是否為細胞特性或者有其他因素刺激導致;

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日常操作避免染菌以及使用優(yōu)質(zhì)血清是預防懸浮細胞貼壁的有效方法。


培 養 小 貼 士


1

懸浮細胞常規推薦接種密度:3-5×105cell/mL,生長(cháng)到2×106cell/mL左右可繼續傳代;該密度建議為理論值,實(shí)際按照每個(gè)細胞特性有波動(dòng);

2

培養懸浮細胞需要穩定的生長(cháng)環(huán)境,少操作,少觀(guān)察,更有利于細胞生長(cháng);

3

不建議將聚團的細胞頻繁吹散,等待密度高和狀態(tài)改善時(shí),細胞會(huì )自行散開(kāi);部分細胞聚團生長(cháng)為特性,吹散不利于生長(cháng),請注意查看相關(guān)培養說(shuō)明;

4

有些細胞本身就是聚團生長(cháng)(NK92,NK92MI,JURKAT,H209,ATT20等),有些細胞本身就形態(tài)不圓(H9等),為正?,F象,無(wú)需特殊處理;

5

豎瓶培養可以促進(jìn)細胞生長(cháng),但由于拿出來(lái)觀(guān)察時(shí)都是橫瓶,觀(guān)察久了細胞會(huì )貼到底部,觀(guān)察完再次豎起來(lái)就會(huì )有細胞掛在瓶底部,而細胞沒(méi)有培養基滋潤很快就會(huì )死掉并殘留在壁上,從而導致養著(zhù)養著(zhù)細胞越來(lái)越少,貼壁細胞越來(lái)越多;因此,在培養瓶豎置操作時(shí)需注意吹下培養瓶底部的細胞,避免細胞殘留。

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